近年来，分子遗传学诊断技术发展迅速，荧光定量PCR（QF-PCR）技术、荧光原位杂交（FISH）技术、多重连接探针扩增（MLPA）技术、实时荧光PCR技术、染色体微阵列分析（CMA）技术、产前液相芯片（BoBs）技术、无创性产前基因检测（NIPT）等已逐渐成熟，并开始向临床转化。分子遗传学诊断技术多以遗传物质DNA为检测对象，不需要进行细胞培养，为传统的细胞染色体核型分析技术提供了有效的补充。
QF-PCR技术在国外已有较广泛的应用，但目前尚未在国内产前诊断临床中普遍开展。为规范使用QF-PCR技术，由国家卫生和计划生育委员会召集、中国医学科学院北京协和医院产前诊断中心主办的”全国产前筛查与诊断技术管理规范编制研讨会”于2015年11月14日在成都召开，会议就QF-PCR等快速产前诊断技术的临床应用进展及其在国内应用中存在的具体问题进行了深入而广泛的探讨，并形成了QF-PCR技术在产前诊断中的应用专家共识。
（1）常规产前筛查提示染色体非整倍体高风险的孕妇或高龄孕妇（需告知局限性）：有常见染色体非整倍体产前诊断需求，无既往不良孕产史，超声筛查胎儿结构未发现明显异常。（2）NIPT高风险孕妇：已采用针对21三体、18三体、13三体等常见染色体非整倍体的NIPT筛查，提示高风险，需要明确诊断者。
（1）QF-PCR与染色体核型分析技术联合应用于染色体异常的产前诊断：染色体核型分析技术通常需要2~3周的时间发出报告。QF-PCR与染色体核型分析技术联合应用，有助于早期诊断常见染色体异常，使临床能早期处理异常胎儿，并有助于缓解孕妇及家属的等待焦虑。适用的产前诊断指征包括：产前筛查高风险，高龄孕妇，超声检查示胎儿异常且提示为13、18、21、X、Y等染色体数目异常等。
（2）QF-PCR与其他细胞遗传学分子诊断技术同时应用：QF-PCR技术检测的是样本DNA而不是活体细胞，所需样本量少，方便应用。在临床应用其他细胞遗传学分子诊断技术时，可同时应用QF-PCR技术获得13、18、21、X、Y等染色体数目的信息，有助于排除常见染色体异常情况，辨别是否存在母体细胞污染，或对其他分子诊断技术的检测结果进行验证等。其指征包括：①在进行单基因遗传病分子诊断时，应用QF-PCR技术检测常见5种染色体的数目异常；②在产前诊断操作中疑有母体细胞污染时，利用QF-PCR技术检测的STR多态性信息辨别采集的胎儿标本中是否混有母体组织细胞；③当其他用于常见染色体数目异常诊断的分子诊断技术（如FISH）的结果异常或不明确时，可采用QF-PCR技术进行验证。
QF-PCR技术检测可采用各种类型的产前标本。所需要的标本量为羊水1~5 ml，或绒毛0.2~2.0 mg，或脐血0.2~2.0 ml。需注意的是，（1）羊水标本离心后如肉眼可见红色血液污染，则需将羊水标本同孕妇外周血标本同时检测，判断有无母体细胞污染；（2）所有的绒毛标本均需将胎儿标本同孕妇外周血标本同时检测，以排除母体细胞污染；（3）由于局限性胎盘嵌合体现象的存在，绒毛标本的细胞可能嵌合有正常及异常核型的细胞，采用绒毛标本提取DNA时应尽可能使用多条绒毛的混合细胞提取核酸；（4）如果绒毛标本经QF-PCR技术检测出染色体三体，而胎儿又无其他临床征象提示异常则建议对绒毛标本进行染色体核型分析，或抽取羊水进行QF-PCR技术检测。
建议采用已注册的商品化试剂盒进行QF-PCR技术检测，按试剂盒说明书进行染色体非整倍体异常的诊断。参考ACC-CMGS指南，试剂盒所采用的STR基因座应在所应用的人群中具有高度的异质性和多态性。其中，常染色体和X染色体的检测基因座应至少有4个，Y染色体特异性检测基因座至少两个（建议包含SRY基因座），同时应包含能反映X染色体、Y染色体数量比例的基因座（如AMEL基因座）；建议加用1个X染色体计数基因座，如TAF9b基因座（同时位于3号染色体短臂和X染色体长臂上），当Y染色体缺如时可以对X染色体计数。
（1）关于X单体的诊断：如Y染色体特异性检测基因座（如SRY）未出现基因型，并且其余性别基因座均显示为单等位基因型，可初步考虑X单体高风险；确诊需要结合X染色体计数基因座（如TAF9b）的检测。需注意：性染色体的多态性检测（即STR检测）对单体而言只是筛查不是诊断，特别是当STR使用数量较少或家族具有同族血缘关系时假阳性风险更高。确诊必须采用X染色体计数基因座，如果没有，则需应用其他产前诊断技术进行确诊或在出具的报告内说明局限性。
（2）关于染色体三体的诊断提示：超过两条染色体的STR出现三等位基因型，其他染色体的STR检测无与之矛盾的结果，提示可能存在染色体三体，可采用其他产前诊断技术进一步验证。
（3）关于三体嵌合体的诊断：当某染色体上有单个或多个STR出现多余等位基因（三体最多出现3个等位基因），应注意观察是否存在嵌合体。QF-PCR技术一般可检测出嵌合比例在20%及以上的三体嵌合体。
QF-PCR技术检测结果异常，可单独出具诊断报告，以便临床早期处理异常胎儿；QF-PCR技术检测结果未显示异常，不排除存在目标染色体以外的其他染色体异常，应在报告中告知QF-PCR检测的局限性和存在其他染色体异常风险等情况。
QF-PCR技术临床检测项目应在有产前诊断资质的医疗机构中开展。项目申请的要求参照我国卫生行业标准《胎儿染色体异常与开放性神经管缺陷的产前筛查与诊断技术标准》（WS 322.2-2010）。申请QF-PCR技术检测的医师应是经过产前诊断专业培训的、有资质的医师。
在进行产前QF-PCR检测前和检测后，必须对孕妇及家属进行相关的产前遗传咨询。根据2002年颁发的《产前诊断技术管理办法》的有关规定，从事产前诊断技术的卫生专业技术人员，必须经过系统的产前诊断技术专业培训，通过省级卫生行政部门的考核并获得从事产前诊断技术的”母婴保健技术考核合格证书”。
在进行产前QF-PCR技术检测之前，必须与孕妇有充分的知情谈话，需说明QF-PCR技术检测的内容、风险和技术局限性，并签署相关的知情同意书。
参照卫生行业标准《胎儿染色体异常与开放性神经管缺陷的产前筛查与诊断技术标准》（WS 322.2-2010）进行标本采集。
QF-PCR技术检测应在获得体外基因扩增检测资质的PCR实验室中进行。实验室应配备毛细管电泳仪、PCR扩增仪等相应的实验设备，并建有实验操作技术文件；实验室操作人员应经过体外基因扩增检验实验室技术的专业培训并获得许可资质；出具诊断报告的人员应是具备产前诊断资质的医师，并经过QF-PCR技术的相关培训。
出具QF-PCR技术检测报告时，应在报告中明确说明检测结果的提示意义与局限性。
QF-PCR技术虽然不能检测完整核型，但对21三体、18三体、13三体及性染色体的数目异常而言，是1项性价比较高的产前分子遗传学诊断技术，有良好的应用前景。在产前筛查蓬勃发展，而国内产前细胞染色体核型分析诊断资源不足的情况下，规范应用QF-PCR技术有助于缓解细胞染色体核型分析供不应求的矛盾，也有助于加强我国染色体异常出生缺陷二级预防的力量，完成常见染色体非整倍体异常的产前诊断，希望在降低严重缺陷儿出生率、提高出生人口素质等方面发挥出积极的社会意义和经济意义。
来源：Alabmed
