样本放置时间对部分免疫项目测定结果的影响
目前免疫检测市场规模在逐年递增，而化学发光作为免疫检测中灵敏度更高，结果更精准的技术，正在不断的向二级以下医院市场普及。但由于样本量的限制，部分用户经常出现3-7天才开机一次上样本的情况。而目前大量二级以下医院对于影响检测结果的关注点仅仅停留在内源性干扰上，而对于样本前处理，样本放置时间等外源性干扰关注度并不高，本文旨在讨论样本放置时间对于部分项目测定结果的影响。
NSE（神经原特异性烯醇化酶）
神经元特异性烯醇化酶(NSE)：血清NSE是神经元和神经内分泌细胞所特有的一种酸性蛋白酶，神经内分泌肿瘤的特异性标志，如神经母细胞瘤、甲状腺髓质癌和小细胞肺癌(70%升高)，可用于鉴别诊断、病情监测、疗效评价和复发预报。
糖分解烯醇酶(2-phospho-D-glycerate hydrolase. EC 4.2.4.11 ，分子量约为80kD) 有多种二聚异构体，由三种亚单位α、β 和γ组成。烯醇酶α亚单位见于哺乳动物多种类型组织中，而β亚单位则主要见于心脏和肌肉组织。αγ和γγ酶异构体称为神经元特异烯醇化酶（NSE）或γ －酶，高浓度存在于神经细胞和神经内分泌细胞以及这些细胞所引发的肿瘤细胞中。
NSE半衰期为1.5-24h，并且NSE也存在于红细胞及血小板中，临床检测结果会受溶血及半衰期等因素影响，其中放置时间越长，结果越容易偏高，易造成假阳性结果的存在。下图显示了不同放置时间对检测结果的影响。
部分厂家说明书中也有相关保存条件的提示
（罗氏）
为此，建议对于排队0．5 h～1 h的样本可以置于冷冻条件下保存，可获得较高的检测质量，而对于需要排队1 h以上检测的样本，如果检测结果为阳性，应建议受检者进行二次检测(在样本获得后的0．5 h内检测)，以降低神经元特异性烯醇化酶检测的假阳性率。
HE4（附睾蛋白4）
人附睾蛋白4（HE4）是一种新型的卵巢癌特异性肿瘤标志物，其特异性和灵敏度高于CA125。HE4是由WFDC2基因编码的，分子量为25kD左右的分泌型糖蛋白，主要在卵巢上皮癌、子宫内膜癌中过量表达，在肺癌和胃癌中也有一定阳性率。HE4的过量表达可促进卵巢癌细胞的增值、浸润和转移。
由于HE4在常温下稳定性较差等因素，不同厂家说明书中均对样本存放条件进行了说明
（雅培）
（罗氏）
因此对于HE4的检测，如果在离心之后不能马上进行，建议立刻放置于2-8度环境下保存。
cTnI（肌钙蛋白I）
肌钙蛋白（troponin，Tn）是肌细胞内肌纤蛋白上的一种调节钙介导的肌动蛋白和肌球蛋白之间相互反应的蛋白，存在于心肌和骨骼肌中，由肌钙蛋白T（TnT）、肌钙蛋白I（TnI）及肌钙蛋白C（TnC）三种亚单位组成。TnT是原肌球蛋白结合亚单位，与肌动蛋白及原肌球蛋白互相作用；TnI是抑制亚单位，抑制肌动球蛋白的ATP酶活性；TnC是唯一与钙结合的亚单位，可使骨骼肌或心肌收缩。心肌肌钙蛋白（cTn）分为两型，即心肌肌钙蛋白T（cTnT）和心肌肌钙蛋白I（cTnI）。cTnT在急性心肌梗死后2小时就能在血清中测出，存在时间长，浓度较高。cTnI在急性心肌梗死早期诊断上的价值与cTnT相同。
由于血清中的肌钙蛋白I在常温下会产生快速降解，如不能及时检测，会造成检测结果的严重降低，下图显示了不同放置时间对检测结果的影响
不同厂家在说明书中也均对该项目的放置时间做了较严格的要求。
（雅培）
（罗氏）
（西门子）
因此对于cTnI项目来说，如果离心后测试不能马上进行，建议立刻吸出血清，保存在2-8°C环境中（可保存达72小时）
Folate（叶酸）
叶酸是一种水溶性维生素，它不存在于自然界中也无生物活性，但为具有生物活性的叶酸盐(folate)的前体。叶酸盐在自然界广泛存在，动植物中都有，肝、肾、绿叶蔬菜、土豆、麦麸等含量丰富。叶酸能传递一碳基团(甲基或甲酰)给脱氧尿苷酸，使之变为脱氧胸苷酸，进而合成DNA。
血清中存在的抗生素、叶酸盐拮抗物、血清乳酸杆菌抗体或样品暴露在日光下，均可使测定值呈假性降低。因此叶酸对样本放置时间同样存在要求。
（西门子）
（罗氏）
（雅培）
由于血清中的抗生素，以及光照等因素均会使叶酸发生降解，造成测试结果降低，因此建议在离心之后立刻进行测试，如不能马上进行测试，需将血清吸出，避光保存在2-8°C环境中。
Insulin（胰岛素）/C-peptide（C 肽）
胰岛素是一个含有51个氨基酸组成的蛋白激素，它由两条肽链即A链（含有21个氨基酸）和B链（含有30个氨基酸）通过二硫键连接组成，相对分子量为5808道尔顿。胰岛素是胰岛β细胞分泌的一种蛋白质激素，能维持机体血糖在一个恒定的浓度，以防止血糖中毒。它是体内唯一能降低血糖的激素。
胰岛素在其它激素的配合下，调节糖、蛋白质和脂肪的合成与分解代谢，而它最重要的作用是促进三大物质在体内的贮存。
C肽是一条含有31个氨基酸的多肽分子，分子量约为3000道尔顿，是胰脏中β胰岛细胞合成的胰岛素原的一部分。
C肽具有稳定的性质，并且和胰岛素成等分子分泌，因此可以作为一种指标去评估糖尿病患者的剩余胰岛β细胞的功能以及胰岛素分泌的水平。
胰岛素和C肽定量及监测的临床价值
评价β细胞分泌功能，区分I型糖尿病和II型糖尿病，为糖尿病人治疗方案的选择和治疗效果评估提供依据；
正常空腹血浆胰岛素和C肽趋于稳定水平。餐后正常人血清胰岛素峰值约为空腹时的5~10倍，峰值一般出现在餐后30~60分钟。通过胰岛素/C肽释放试验测定空腹及服糖后血浆胰岛素水平可了解胰β细胞的储备功能，有助于糖尿病的分型及指导治疗。
但是，血清中的C肽/胰岛素会在放置4小时以后会逐渐失去活性，造成检测结果的降低，对正确绘制C肽/胰岛素释放曲线产生较大影响。因此各大厂家说明书中也均有对样本放置时间的要求。
（西门子）
（罗氏）
因此，对于糖代谢的这两个项目，应当在抽血之后尽快离心，并立刻上机测试，如不能当天立刻上机测试，则建议吸出血清，冻存在-20°C环境中。
由于部分免疫测定结果受到样本放置时间影响非常大，为避免对临床检测结果造成假阴性或假阳性等不良影响，建议按照各厂家说明书对不能及时检测的样本进行处理。
参考文献：
彭岚，陈敏，陈洁，李春仙-影响神经元特异性烯醇化酶检测的因素分析验证 中国卫生检验杂志2015年12月第25卷第23期
郑吉平、汪宁生、严克贵-血液标本放置时间对心肌肌钙蛋白I检测结果的影响 实用医技杂志2008年9月第15卷第27期
罗氏电化学发光检测项目标本收集一览表
来源：灯塔光免小助手
