EB病毒诊断之抗体谱，抗原选择有讲究
编者按：
EB病毒感染在世界范围内广泛分布，其感染机体后潜伏在宿主细胞中，当宿主的免疫系统受损时被重新激活。COVID-19肆虐全球已一年有余，随着对SARS-CoV-2研究的深入，科学家发现感染SARS-CoV-2会导致人体免疫力下降。另外，诸如EB病毒激活会影响CoVID-19的治疗，EB病毒和SARS-CoV-2协同作用会提高病死率等见诸报道。我们相信，在科研工作者的持续努力下，这些难题可以一一得到解决。当前，在感染SARS-CoV-2会导致人体免疫力下降背景下，应更加重视潜伏感染类病毒（如EB病毒）的防治。
EB病毒的流行病学及实验室诊断
EB病毒的感染非常普遍。WHO官方数据显示，全球有约95%的成年人感染EB病毒。不仅是成年人，未成年人尤其是儿童受EB病毒的影响更大。由于免疫系统尚未发育成熟，未成年人感染EB病毒后更大几率引发严重疾病。研究发现，在发展中国家原发性EB病毒感染通常在儿童时期以无症状或临床上非特异性的方式发生。中国儿童EB病毒血清阳性率在3岁以前超过50％，在8岁以后超过90％。
EB病毒原发感染后建立终身潜伏感染，在特定情况下可被激活并大量增殖。上文提到的机体免疫系统受损就是重要的激活因素之一。EB病毒原发感染或复发感染均可引发不同的疾病。关于EB病毒诊疗指南或专家共识均肯定血清学检测的重要作用。通过检测特异性抗体谱来判断疾病种类。如表1。表1：EB病毒特异性抗体谱及疾病种类判断
（根据《EB病毒感染实验室诊断及临床应用专家共识（2018）》整理）
EB病毒血清学诊断—特异性抗体谱
由前文可见，EB病毒的血清学诊断依赖特异性抗体普，联合检测多个标志物，综合判断疾病的种类和感染状态。这有别于其他病原体的临床诊断——通过单个标志物的特异性抗体（IgG/IgM/IgA）来判断。在EB病毒的临床诊断中，同时检测患者血清中数种EB病毒特异性抗体，可以提高诊断原发性EB病毒感染的敏感性和特异性，帮助判断原发性EB病毒感染、既往感染或既往EB病毒感染再激活。如表2。表2：EB病毒特异性抗体谱判断机体免疫状态
（根据《EB病毒感染实验室诊断及临床应用专家共识（2018）》整理）
为了更直观地理解EB病毒的特异性抗体谱，我们找到EB病毒的血清抗体动力学图。如图1。机体感染EB病毒后，B淋巴细胞被激活并转化为浆细胞，分泌各种抗病毒抗体。病毒衣壳蛋白（VCA）在病毒增殖时期表达，与病毒的复制有关。其VCA-IgM抗体在感染开始阶段出现，一般2-3个月消失。由于VCA-IgM抗体呈短暂出现，通常认为其是EB病毒急性感染的标志性抗体。而VCA-IgG抗体也在感染开始阶段随VCA-IgM抗体出现，但其可在体内持续存在多年或终生，因此不能用于区分急性感染或既往感染。EB病毒核蛋白（EBNA）在原发感染的恢复期产生，EBNA-IgG抗体阳性常被认为是既往感染的特定指标。另外，病毒早期蛋白（EA）在病毒增殖时期表达，与病毒的复制有关。EA-IgG抗体在VCA-IgM和VCA-IgG抗体之后出现，达峰值后持续几周，可以作为急性感染（包括原发感染晚期及既往感染再激活）的诊断指标。
图1：EB病毒血清抗体动力图
EB病毒检测试剂的抗原选择
对于EB病毒检测试剂开发，正确选择抗原种类是前提。
EB病毒可编码多种结构蛋白，包括VCA、EA和EBNA等。当前对EB病毒感染机制研究较深入。研究发现，机体感染EB病毒后，主要针对VCA、EA和EBNA三种蛋白产生免疫应答。图2是EB病毒的蛋白质图谱。研究发现，VCA-p18、VCA-p23、EA-p54、EA-p138和EBNA-p72是主要引起免疫应答的病毒蛋白，适合用于疾病诊断。
图2：EB病毒的蛋白质图谱
在VCA抗原选择上，检测特异性IgG或IgM有不同的蛋白使用策略。VCA-p18在人体中具有高度免疫原性，并包含羧基区域呈现的B细胞表位。VCA-p23可在血清学分析中显示VCA抗体谱。有研究发现，P18用于检测IgM，P18+P23用于检测IgG，其效果更佳。如图3。
图3：EB病毒VCA蛋白的选择
此外，EA-p54和EA -138联合使用，EBNA-p72单独使用，这两组抗原的免疫反应性也被证明具有较高的灵敏度。如图4。
图4：EA-p54+138和EBNA-p72蛋白的反应性
总结
EB病毒的实验室诊断依赖于特异性抗体谱。正确选择蛋白种类是检测试剂盒开发的必要条件。VCA、EA和EBNA是主要引起免疫应答的病毒蛋白。为了达到最佳的使用效果，推荐VCA-p18用于检测特异性IgM，VCA-p18+p23用于检测特异性IgG，EA-p54+p138用于检测特异性IgG，EBNA-p72用于检测特异性抗体。参考文献1.Serological diagnosis of Epstein-Barr virus infection: Problems and solutions.2.Diagnosis of Epstein-Barr virus-related diseases.3.Routine Epstein-Barr Virus Diagnostics from the Laboratory Perspective: Still Challenging after 35 Years.4.Clinical manifestations and treatment of Epstein-Barr virus infection.5.EB病毒感染实验室诊断及临床应用专家共识（2018）。
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